MHC基因反义RNA导入造血干/祖细胞的研究

摘要

目的:将HLA-DRB1基因cDNA片段反向插入逆转录病毒质粒ZIP-neoSV(×)Bam HI位点中,构建了HLA-DRB1基因的逆转录病毒反义RNA重组表达载体,用脂质体法导入PA317细胞.方法:用免疫磁珠法分离,富集CD34+脐血造血干/祖细胞.含编码人HLA-DRB1基因的pcDV1质粒,用Bam HI酶解,回收HLA-DRB1 cDNA片段,将cDNA片段反向插入pZIP-neoSV(×)逆转录病毒载体,经扩增、抽提、酶切鉴定,用脂质体将反义RNA重组体导入到PA317细胞,用含G418 300 μg/ml培养液筛选,获抗性克隆,流式细胞仪检测HLA-DR抗原阳性细胞数.结果:重组质粒转染PA317细胞后,其病毒滴度达1×105CFU/ml,脐血造血干/祖细胞经免疫磁珠富集后,CD34+细胞高达85.0%～90.0%,导入反义RNA的脐血干细胞,其HLA-DR抗原表达从导入前的45.0%降至28.0%,抑制率达38.2%,而导入空载体后从56.0%降至45.0%,差异不显著.结论:HLA-DR的反义RNA能导入脐血干细胞,降低HLA-DR抗原的表达.