λ轻链抗原的克隆与表达

摘要

目的:应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因,探索有效制备高纯度轻链抗原技术.方法:应用已有pComb3抗-HBsFab表达载体,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因,合成互补于两酶点粘端的短核苷酸链,并加以多聚组氨酸编码基因,通过复性、连接酶连接构建λ轻链表达载体.结果:重构建载体的单酶切、电泳表明分子的大小为4.4 kb,已切除H链基因;阳性株经IPTG诱导表达上清的免疫转印结果显示为抗轻链血清反应带;电泳位置与轻链的分子量吻合,成单一区带;直接ELISA结果表明,正确连接的克隆表达上清与抗Polyhis血清发生反应.结论:用生物工程技术克隆表达λ轻链具有简便、实用的特点,更易获得高纯度产品,是可以替代常规轻链抗原提纯的理想方法.