人IL-2信号肽和大鼠心肌肌凝蛋白α重链片段融合基因的构建及分泌表达

摘要

目的:克隆编码大鼠心肌肌凝蛋白α重链aa736～960的cDNA片段,构建携带融合基因的逆转录病毒分泌表达载体.方法:以RT-PCR方法从幼龄大鼠心肌组织中扩增出681 bp的目的基因,与hIL-2cDNA序列拼接,构建融合基因hIL-2/myosin及其逆转录病毒载体.采用脂质体法转染NIH3T3和PA317细胞,经G418筛选后,用RT-PCR、免疫组化、免疫电镜和Dot-blot法分析检测融合基因的表达.结果:核苷酸序列测定显示克隆基因的核苷酸及推导的氨基酸序列与报告序列一致,开放阅读框正确;RT-PCR检测提示转染细胞有融合基因mRNA转录;免疫组化、免疫电镜和Dot-blot检测表明转染细胞有该肌凝蛋白重链片段的分泌表达.结论:大鼠心肌肌凝蛋白a重链基因逆转录病毒载体构建成功,并可分泌表达,为心肌肌凝蛋白转基因诱导机体特异性免疫耐受及对心肌免疫损伤的研究打下了基础.