大鼠心肌肌凝蛋白a重链基因逆转录病毒载体的构建

摘要

目的 :克隆编码大鼠心肌肌凝蛋白α重链 aa736～ 96 0的 c DNA片段 ,构建携带 hu IL - 2 / m yosin融合基因的逆转录病毒载体。方法 :以 RT- PCR方法从幼龄大鼠心肌组织中扩增出 6 81bp的目的基因 ,与 hu IL - 2 c DNA序列拼接 ,构建融合基因 hu IL - 2 / m yosin及其逆转录病毒载体。采用脂质体法转染 NIH 3T3细胞 ,经 G418筛选后 ,用 RT- PCR和免疫组化法分析重组逆转录病毒的表达。 结果 :核苷酸序列测定显示 ,克隆基因的核苷酸及推导的氨基酸序列与报告序列一致 ,开放阅读框正确 ;逆转录病毒载体 p L NC- hu IL - 2 - m yosin酶切结果与预期一致。RT- PCR检测提示转染细胞有 p L NC- hu IL - 2 - myosin m RNA转录 ;免疫组化分析表明转染细胞胞质内有大量肌凝蛋白表达。 结论 :大鼠心肌肌凝蛋白α重链基因逆转录病毒载体构建成功 ,并可在 NIH3T3细胞中表达 。