EBV-LMP2A重组腺病毒体外转染树突状细胞激发特异性CTL的研究

摘要

目的:用EBV潜伏膜蛋白2A(EBV-LMP2A)重组腺病毒转染树突状细胞(DC)激发特异性细胞毒性T细胞(CTL),分析CTL的特性.方法:用Ad5-LMP2A重组腺病毒转染EBV健康携带者及鼻咽癌患者的DC,与自体来源的外周血单个核细胞(PBMC)混合培养,激发LMP2A特异性CTL.用LDH释放法检测CTL杀伤活性;流式细胞术(FACS)检测培养细胞群体中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+细胞的组成;生物活性法检测细胞培养上清中IFN-γ含量;RT-PCR分析CTL的FasL mRNA表达.结果:EBV健康携带者及鼻咽癌患者的PBMC,经Ad5-LMP2A转染的自体DC两次刺激后,都能诱导出显著的EBV-LMP2A特异的CTL.EBV健康携带者CTL的杀伤活性,随DC刺激次数的增加而逐渐增强,诱导的CTL细胞群体以CD4+和CD8+细胞组成为主,且CD4+细胞比例高于CD8+细胞,另含少量CD56+细胞;在不同时段所诱导的CTL上清中,均含一定量的IFN-γ,并随刺激次数和诱导时间的延长呈上升趋势;RT-PCR研究表明,所诱导的CTL有FasL mRNA的表达.结论:以腺病毒载体介导EBV-LMP2A基因转染的成熟DC,在体外能激发较强的LMP2A特异的功能性CTL,可用于EBV相关NPC的免疫治疗.