BPIm23重组抗菌蛋白在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

摘要

目的:采用巴斯德毕赤酵母表达系统表达分泌型功能性rBPIm23抗菌蛋白.方法:利用构建的pUC18-synBPI414质粒和PBV220-BPIm420质粒,按分子克隆方法构建pPICZα-synBPIm600重组表达载体;用线性化pPICZα-synBPIm600质粒电转化Pichia pastoris GS115,筛选抗性转化子,进行PCR和Mut表型鉴定;用甲醇诱导目的蛋白rBPIm23的表达;用离子交换层析纯化rBPIm23,并进行SDS-PAGE分析、Western blot鉴定和用BCA法定量.结果:①成功构建了pPICZα-synBPIm600重组表达载体;②获得稳定整合目的基因的GS115菌株;③表达产物相对分子量约为23 kD,可与抗BPI抗体特异性结合;④培养上清液中目的蛋白表达量约为 2.9 mg/L.结论:BPIm23重组抗菌蛋白在毕赤酵母GS115中得到分泌表达.