抗Pgp基因工程抗体ScFv的构建、表达及其活性测定

摘要

目的:构建表达抗PgpScFv,进行体外活性的测定.方法:利用RT-PCR方法,克隆抗Pgp杂交瘤细胞PHMAO2的重链可变区基因(VH),轻链可变区基因(VL),拼接为单链抗体(ScFv),再克隆到具有强启动子的PET28a(+)载体上进行表达,并进行了表达产物体外活性的测定.结果:构建了表达质粒PET28a(+)-ScFvPGP.表达产物可与表达Pgp抗原的K562/A02细胞特异性结合,并不抑制Pgp外排泵的功能.结论:构建表达的抗PgpScFv只有针对Pgp抗原的识别功能,并无抑制作用,因此应用于人体后不会干扰正常细胞的排泄分泌功能,无论是作为靶向诊断治疗的载体还是作为双功能抗体的一臂,均具有广泛的应用前景.