绿色荧光蛋白-去整合素融合蛋白的表达及其结合功能的研究

摘要

目的:构建绿色荧光蛋白(GFP)-去整合素(disintegrin)融合基因,表达并分析该重组蛋白的生物学活性.方法:利用HF-PCR扩增Ⅱ型蛇毒出血性金属蛋白酶agacutin基因的去整合素区,并与绿色荧光蛋白基因进行拼接;将GFP-去整合素融合基因克隆入表达载体pQE-30,IPTG诱导重组蛋白表达;流式细胞术(FCM)与荧光显微镜分析重组蛋白与细胞的结合能力.结果:GFP-去整合素融合蛋白的表达载体在大肠杆菌M15中得到有效表达,菌体呈绿色.表达的蛋白量占菌体总蛋白的38%左右,免疫印迹证实分子量约为39kD;FCM分析显示该重组蛋白可与表达整合素的乳腺癌细胞MDA-MB-231和内皮细胞EA.hy926特异结合,在荧光显微镜下可见与重组蛋白结合的细胞发出绿色荧光.结论:GFP-去整合素融合蛋白可与表达整合素的细胞结合,并保留了各自的生物学活性,可用作肿瘤与血管生成等研究的新的分子标记物.