CMTM1-v17/CKLFSF1-v17多克隆抗体的制备、亲合纯化与鉴定

摘要

目的:CMTM1-V17是我室克隆的人类新基因,为进一步研究CMTM1-v17的功能,需制备高纯度的CMTM1-v17的抗体.方法:根据生物信息学分析的结果,用PCR法扩增人CMTM1-v17分子C端的cDNA片段(编码118～149位氨基酸),亚克隆到GST融合蛋白表达载体pGEX-4T-2上.将重组质粒pGST-CMTM1-v17导入大肠杆菌BL21,诱导表达GST-CMTM1-v17 C端融合蛋白,经GST亲合层析、凝血酶切割后获得CMTM1-v17 C蛋白作为抗原免疫家兔制备抗血清.抗血清经抗原亲合层析后用Western blot和免疫组化方法进行鉴定.结果:通过重组表达获得抗原蛋白,免疫家兔并纯化抗血清得到特异的抗CMTM1-v17抗体,该抗体能检测到CMTM1-v17超表达和细胞内源性的蛋白.结论:成功制备了抗CMTM1-v17的多克隆抗体,对进一步研究CMTM1-v17的功能提供了一个有用的工具.