ICA512的表达及人抗ICA512抗体测定方法的建立

摘要

目的:从人胰脏β-细胞中对ICA512进行基因克隆和蛋白质表达,最终应用于人自身抗体的测定.方法:应用逆转录技术从人胰脏RNA中合成出ICA512的cDNA.经DNA PCR扩增后,克隆到两种带有不同融合蛋白的表达质粒,然后转化至大肠杆菌中,表达出两种该重组蛋白.并利用该两种表达蛋白建立起抗ICA512抗体的ELISA测定法(双抗原夹心法).结果:用英国RSR ICA512测定试剂盒对表达蛋白进行免疫学分析对照,表明研究中表达的蛋白是具有免疫活性的ICA512.建立的ELISA和RSR放免法的测定结果基本吻合. 结论:研究中所表达的ICA512可用于人自身抗体测定进行1 型糖尿病(T1DM)诊断,在操作的简便性方面更是优于同类进口测定试剂盒.