蛋白激酶C调节血管内皮细胞CD44分子表达的机制

摘要

目的:研究血管内皮细胞蛋白激酶C对CD44分子表达的调控机制.方法:以人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells ,HUVECs)为研究模型.利用免疫沉淀法制备Raf-1激酶的提取物,以Western blot 及增强化学发光法检测Raf-1激酶活性;放射自显影检测CD44的磷酸化情况;RT-PCR方法检测CD44基因表达.结果:与未处理的细胞相比较, 加入10 ng/ml的Phorbol-myristate-acetate(PMA)后,CD44磷酸化随时间延长而明显增强, 尤以30分钟时最显著.HUVECs的PKC活化后,Raf-1 Kinase活性明显增强,加入Calphostin C后其活性则被抑制;10 ng/ml PMA 处理1分钟,即能看到CD44基因表达明显升高(P＜0.05),而先加入0.05 μmol/L Calphostin C、30 μmol/L RKIP, 5 μmol/L PD98059、10 μmol/L Genistein 预处理HUVECs,则能抑制PMA对CD44基因表达的上调作用.结论:PKC活化通过对CD44的磷酸化作用而影响CD44基因表达,其信号传导途径为PKC→Raf-1Kinase→MEK→ERK.此路径相关酶的抑制剂能抑制CD44基因的表达.