猪链球菌2型四川人源分离株ZYH24细胞外蛋白因子的原核表达及活性分析

摘要

目的:克隆、达猪链球菌2型四川人源分离株ZYH24细胞外蛋白因子基因片段,分析蛋白活性.方法:根据GenBank S.suis 2 epf基因序列设计引物,克隆ZYH24株epf 基因片段并进行序列分析;构建原核表达质粒pGEX4T-2-epf,在大肠杆菌中诱导带有谷胱苷肽转移酶(GST)标签的融合蛋白EF-GST的表达;亲和层析法纯化融合蛋白EF-GST,用凝血酶切除重组蛋白中的GST,获得纯化的EF抗原;SDS-PAGE和Western blot分析诱导表达及纯化的重组蛋白.结果:序列分析表明,获得的epf基因片段长895 bp;原核表达的融合蛋白EF-GST分子量约62 000,凝血酶处理后的EF抗原分子量约35 000,两者均可与制备的EF多克隆抗血清发生特异性反应.结论:成功克隆了人源分离株ZYH24 epf基因片段,在原核系统实现高效的功能性表达,为开展EF蛋白的相关研究奠定了基础.