一种经肝门静脉注射制备肠源性脓毒症大鼠模型的方法

摘要

目的建立一种经肝门静脉注射制备肠源性脓毒症(GOS)大鼠模型。方法清洁级SD大鼠84只(250~300 g,12周龄),12只大鼠用于盲肠结扎并穿孔法(CLP)制备肠源性腹腔渗出液。72只大鼠采用随机数字法分为肝门静脉对照组(PV-S组)、肝门静脉渗液组(PV-E组)和下腔静脉渗液组(VC-E组),每组24只。PV-S组经肝门静脉注射0.9%氯化钠注射液(1 m L/只),PV-E组和VC-E组分别经肝门静脉和下腔静脉注射等量腹腔渗出液。各组大鼠再按腹腔渗液注射后1,2,4,6 h分为4个亚组。各亚组大鼠在相应时相点经腹主动脉采血,处死后取肺组织并收集肺泡灌洗液(BALF),测定血清和BALF中内毒素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)含量,计算肺组织湿/干重(W/D)比值,观察肺形态学和病理形态学变化。结果 PV-E组在腹腔渗液注射液后1,2,4,6 h血清和BALF中内毒素、TNF-α及IL-6含量以及肺组织病理学评分、肺湿/干重比均显著高于同时相点PV-S组大鼠(P均<0.05)。与PV-E组比较,VC-E组在腹腔渗液注射液后1,2,4,6 h血清和BALF中内毒素水平均升高(P均<0.05),而血清和BALF中TNF-α、IL-6水平降低(P均<0.05)。PV-E组大鼠经肝门静脉注射腹腔渗出液后1,2,4,6 h肺组织W/D值(1 h:8.53±2.05;2 h:9.41±1.24;4 h:10.35±0.69;6 h:11.05±1.95)较同时相点的PV-S组(1 h:5.16±1.13;2 h:5.17±1.34;4 h:5.14±2.04;6 h:5.13±1.95)和VC-E组(1 h:6.71±0.73;2 h:7.65±1.32;4 h:8.40±0.43;6 h:9.41±1.87)均明显增大(P均<0.05)。与PV-S组比较,PV-E组肺组织明显肿胀,有广泛点、片状出血点及淤血;VC-E组肺组织病变程度较PV-E组轻。与PV-S组和VC-E组比较,PV-E组肺病理组织学结果显示肺泡腔中见大量中性粒细胞、单核细胞和红细胞浸润,肺泡壁破坏严重、肺间质明显水肿,各时相点病理学组织学评分高于PV-S组(1 h:5.32±1.35 vs 0.25±0.02;2 h:6.44±0.72 vs 0.23±0.04;4 h:7.52±1.45 vs 0.27±0.02;6 h:8.69±0.35 vs 0.22±0.05,P均<0.05)和VC-E组(1 h:5.32±1.35 vs 3.37±0.73;2 h:6.44±0.72 vs 4.82±1.32;4 h:7.52±1.45 vs 6.47±0.43;6 h:8.69±0.35 vs 8.4±1.87,P均<0.05)。结论采用CLP方法制备腹腔渗出液,经肝门静脉注射后可成功建立肺损伤为突出表现的GOS大鼠模型。