环孢素A联合Wortmannin对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制作用及对蛋白激酶B信号通路的影响

摘要

目的:探讨环孢素A(cyclosporin A,CsA)联合Wortmannin对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用及对蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT1)活性的影响,并解释其可能的分子机制。方法:培养人胃癌SGC-7901细胞,采用CCK8(Cell Counting Kit-8)法检测不同浓度环孢素A(5,10,20,40,80μmol·L-1)和不同浓度Wortmannin(10,50,100,500,1000 nmol·L-1)作用于胃癌细胞SGC-7901不同时间(24,48,72 h)后的细胞增殖抑制情况,并计算半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC_(50));根据2种药物的IC_(50)确定最佳药物作用浓度,并分为CsA组、Wortmannin组以及CsA+Wortmannin组,用CCK8法和流式细胞实验检测CsA联合Wortmannin对胃癌细胞的增殖和凋亡水平的影响;Western blot法检测各组细胞中cleaved caspase 3、p-AKT、PI3K以及PKB/AKT1蛋白表达量。结果:不同浓度CsA、Wortmannin对人胃癌SGC-7901细胞作用24,48,72 h后,细胞存活率相比0h显著下降(P<0.05),且随着作用时间延长,细胞存活率呈逐渐下降趋势(P<0.01)。与对照组相比,CsA组、Wortmannin组、CsA+Wortmannin组细胞存活率均明显降低、细胞凋亡率明显升高,且CsA+Wortmannin组细胞存活率明显低于CsA组和Wortmannin组,细胞凋亡率明显高于CsA组和Wortmannin组(P<0.05或P<0.01)。Western blot实验结果表明,CsA组、Wortmannin组、CsA+Wortmannin组的PKB/AKT1、PI3K、p-AKT蛋白表达均显著低于对照组,Cleaved caspase3蛋白表达率显著高于对照组(P<0.01),且CsA+Wortmannin组PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于CsA组和Wortmannin组,cleaved caspase3蛋白表达率显著高于CsA组和Wortmannin组(P<0.01)。结论:CsA和Wortmannin均对胃癌细胞SGC-7901增殖具有明显抑制作用,且2者联用对胃癌细胞抑制作用显著强于单一药物,细胞增殖抑制作用的发挥可能是通过干扰PI3K/AKT1、PKB/AKT1信号通路和降低蛋白激酶B活性起效。