Ⅰ-Sce I系统的建立及其在诱导肝癌细胞DNA双链断裂中的应用

摘要

目的 建立Ⅰ-Sce I系统并应用该系统制备DNA双链断裂(DSB)的HepG2细胞模型,为进一步研究DSB与HBV DNA整合奠定基础.方法 通过分子克隆技术构建携带Ⅰ-Sce I内切酶识别序列的pEGFP2真核表达载体,并将其转染入肝癌细胞株HepG2,经G418筛选出稳定转染株,随后瞬时转染表达归位内切酶Ⅰ-Sce I的质粒pCMV-3NSL-Ⅰ-Sce I.24 h后采用免疫荧光法和Western blot检测DNA双链损伤效应分子γ-H2AX的表达,了解DSB情况.结果 酶切鉴定和测序证实pEGFP2构建成功;Ⅰ-Sce I系统引入后HepG2细胞中的γ-H2AX表达明显上调,提示DSB细胞模型构建成功.结论 Ⅰ-Sce I系统能够成功地诱导HepG2细胞株基因组发生DSB,该系统有望为进一步探讨DSB是否为HBV整合的潜在靶位提供有效的研究工具.