人巨细胞病毒感染巨核祖细胞及反义寡核苷酸抗病毒感染作用的研究

摘要

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人巨核细胞及其前体细胞的抑制作用及其机制,并观察HCMV反义寡核苷酸(ASON)的抗病毒感染作用. 方法在半固体培养基上定向诱导CD34+细胞向巨核细胞分化.用HCMV AD169病毒株感染培养的巨核细胞和经ASON预处理的CD34+细胞,观察CFU-MK形成率的变化,分别用PCR、RT-PCR法检测CFU-MK细胞中HCMV即刻早期蛋白(IEP)基因DNA和mRNA、即刻早期基因(UL36) mRNA表达.用MTT法测定ASON的细胞毒性. 结果 CD34+细胞在半固体培养基中定向分化为巨核祖细胞.HCMV AD169株能明显抑制巨核细胞的体外增殖,与灭活病毒组比较,三个不同病毒滴度感染组的CFU-MK分别减少了21.6%、33.8%、46.3%,显示抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系;HCMV感染的CFU-MK细胞中可检出HCMV IEP基因DNA、IEP基因mRNA和UL36 mRNA.0.08 μmol/L的UL36 ASON (UL36Anti)能使HCMV感染细胞CFU-MK形成率恢复正常,与10 000 TCID50 HCMV感染组比较(分别为58.24±7.42和 31.17±4.45),差异有显著性(P<0.05), RT-PCR未能检出UL36 mRNA.而改变UL36Anti中1个碱基的ASON(MM1),浓度只有达到0.40 μmol/L才能对抗HCMV的作用.MTT结果表明UL36Anti显著影响细胞生长的浓度为90.00 μmol/L.结论 HCMV在体外能直接感染巨核细胞及其前体细胞,并抑制其增殖,提示HCMV感染引起的血小板减少与巨核细胞受HCMV抑制有关.特异的ASON有一定的抗HCMV活性.