应用免疫球蛋白重链可变区上框架区来源的抗原九肽获得的细胞毒T细胞功能分析

摘要

目的明确在B淋巴细胞肿瘤表面的免疫球蛋白重链可变区(IgHV)的框架区(FR)上是否存在可以激发细胞毒T淋巴细胞(CTL)的抗原表位,这些来源于FR的抗原肽是否能够激发家族特异性的免疫反应,探讨按照B淋巴细胞肿瘤的IgHV基因分型进行家族性的免疫治疗的可能性.方法利用生物信息学系统预测了40例B淋巴细胞肿瘤表面的免疫球蛋白序列的抗原表位,人工合成不同基因家族的抗原九肽,利用T2细胞结合实验检测预测的抗原肽和HLA分子的亲合力.利用体外CTL刺激扩增体系,诱导特异性的CTL细胞增殖,用肽/HLA四聚体检测特异性CTL的数目,应用LDH释放实验检测CTL的细胞毒活性并验证其家族特异性.结果在B淋巴细胞肿瘤的7个IgHV基因家族中找到了12个高亲和力的抗原九肽,其中10个(83%)位于FR,以HLA-A*0201正常供者的外周血单个核细胞(PBMNC)负荷该九肽作为抗原呈递细胞去刺激自身PBMNC,经过4轮刺激,CD8和肽/HLA四聚体双阳性细胞从0.38%上升到49.38%.LDH释放实验证明对HLA-A*0201(+)、IgHV1(+)靶细胞有明显的杀伤作用,并且被IgHV1肽刺激出的CTL不能识别负荷IgHV3肽的靶细胞.结论IgHV基因FR抗原九肽可以刺激产生具有HLA限制性的并且肽特异性的CTL,同时这样的杀伤作用具有家族特异性,以此为靶位有望对B淋巴细胞肿瘤进行家族特异性的免疫治疗.