实时定量PCR检测IgH基因重排在成人B系急性淋巴细胞白血病微量残留病监测中的意义

摘要

目的应用实时定量PCR（RQ-PCR）方法检测患者的免疫球蛋白重链（IgH）基因重排,探讨其在成人B系急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的微量残留病（MRD）动态监测中的意义。方法 15例B系ALL患者的初诊DNA标本经PCR扩增重排的IgH基因,克隆产物经基因测序、序列比对后,根据每例患者的克隆特异性序列信息,利用软件设计15条等位基因特异性寡核苷酸（ASO）引物,作为RQ-PCR检测的上游引物,合成通用的JH下游引物和TaqMan探针,监测患者随访标本MRD靶分子。7例Ph+患者同时用RQ-PCR检测bcr-abl融合基因转录本。结果使用ASO引物RQ-PCR法扩增15例患者IgH重排靶基因的敏感性为10-3～10-5,荧光背景信号未显示或较低。动态监测表明:高危组患者诱导完全缓解（CR）后体内MRD水平明显高于标危组患者,诱导CR后MRD＞10-3的患者复发率（71.4%）高于MRD≤10-3的患者（12.5%）,MRD＞10-3的患者生存时间短。另外,Ph+患者bcr-abl融合基因转录本的对数级变化趋势与IgH重排靶基因水平的动态变化一致。结论使用ASO引物RQ-PCR方法检测IgH基因重排,具有敏感性高、特异性强、结果可靠等优点,可对肿瘤克隆进行准确定量。B系ALL患者体内IgH基因重排水平与临床治疗反应和疾病预后密切相关,可用于患者病情的随访监测。