miR-376a靶向调控IGF-1R表达影响结直肠癌Caco2细胞生物学特性的机制

摘要

目的探讨微小RNA(miR)-376a对结直肠癌Caco2细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人正常结肠上皮NCM460细胞和3种结直肠癌Caco2、HCT116、SW480细胞中miR-376a的表达水平。将体外培养的Caco2细胞分为对照组(未转染)、miR-NC组(转染阴性对照)和miR-376a组(转染miR-376a模拟物),采用细胞计数(CCK)-8法检测各组细胞增殖活力,Tranwell小室检测各组细胞迁移和侵袭。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-376a和胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)的靶向关系,Western印迹检测miR-376a对IGF-1R蛋白表达的影响。将IGF-1R过表达质粒与miR-376a模拟物共转染至Caco2细胞后,观察上调IGF-1R表达对miR-376a过表达的Caco2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果与NCM460细胞比较,Caco2、HCT116、SW480细胞中miR-376a的表达水平均明显降低(P0.05);与对照组或miR-NC组比较,miR-376a组细胞增殖活力、迁移数目、侵袭数目和细胞中IGF-1R蛋白的表达水平均明显降低,而细胞中miR-376a的表达水平明显升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实IGF-1R是miR-376a的靶基因。上调IGF-1R表达后,miR-376a过表达对Caco2细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用明显减弱(P<0.05)。结论miR-376a可通过靶向调控IGF-1R表达抑制结直肠癌Caco2细胞增殖、迁移和侵袭。