miR-199a靶向调控TAB2调节内皮祖细胞抑制深静脉血栓形成

摘要

目的探讨miR-199a在深静脉血栓(DVT)大鼠内皮祖细胞(EPCs)中的表达及在EPCs功能障碍在DVT中的作用和可能的作用机制。方法分离、培养并鉴定DVT大鼠EPCs,qRT-PCR检测miR-199a表达,在EPCs敲减和过表达miR-199a,用Transwell法和基质胶成管实验检测EPC迁移和血管形成能力,通过生物信息学分析、荧光素酶报告基因分析和基因表达分析鉴定miR-199a的靶点TAB2,建立大鼠DVT形成模型,EPCs示踪和苏木素-伊红(HE)染色鉴定miR-199a对DVT的抑制作用。结果分离的EPCs表达干细胞表面抗原VEGFR-2和CD133,miR-199a在DVT大鼠中表达显著下调(P<0.05)。miR-199a mimics组迁移能力和血管形成能力显著高于NC-mimics组,miR-199a inhibitor组迁移能力和血管形成能力显著低于NC-inhibitor组(P<0.05),TAB23′UTR存在与miR-199a结合的位点,荧光素酶报告实验显示,miR-199a可以与TAB23′UTR WT结合,显著抑制荧光素酶活性(P<0.05);miR-199a mimics组TAB2蛋白表达明显低于NC-mimics组,miR-199a inhibitor组TAB2蛋白表达明显高于NC-inhibitor组(P<0.05)。回补实验显示miR-199a通过调控TAB2显著促进EPCs细胞迁移和血管形成(P<0.05)。体内实验显示,过表达miR-199a可显著增强DVT模型大鼠EPCs的归巢能力、机化程度和血栓溶解能力(P<0.05)。结论miR-199a在DVT大鼠EPCs中表达下调,并以TAB2为靶点,在体外增强EPCs的迁移和管状形成,同时增强体内EPCs的归巢和血栓溶解。