miR-29 a通过调控DNMT3 b对宫颈癌细胞周期、凋亡及P16甲基化的影响

摘要

目的 研究微小RNA(miR)-29a对人宫颈癌细胞系Hela细胞凋亡及对细胞周期、P16甲基化的影响及其机制.方法 体外培养正常宫颈上皮细胞HcerEpic和子宫颈癌细胞系Hela、SiHa、MS751,检测细胞中miR-29a表达水平;选择miR-29a表达水平最低的Hela细胞作为过表达miR-29a载体,分为miR-29a过表达(mimics)组和阴性对照(NC)组、空白对照(BC)组,转染48 h,利用CKK-8法检测细胞增殖情况,利用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期变化情况,利用甲基化特异性PCR(MSP)法检测细胞P16基因CpG岛甲基化状态,利用Western印迹检测DNA甲基转移酶(DNMT)3b、p16蛋白表达情况,利用TargetScan数据库预测miR-29a靶基因,荧光素酶报告基因实验进行验证.结果 子宫颈癌细胞SiHa、Hela、MSP175中miR-29a的相对表达水平均较正常宫颈细胞HcerEpic显著降低(P<0.05);转染后,mimics组Hela细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例及p16蛋白表达量均显著高于NC组和BC组(P<0.05),P16基因CpG岛甲基化率、DNMT3b蛋白表达量显著低于NC组(P<0.05).miR-29aNC+p-GL4-DNMT3b-wt组荧光素酶活性强度较miR-29a NC+p-GL4-DNMT3b-wt组显著降低(P<0.05).结论 miR-29a在子宫颈癌细胞中表达水平降低,通过下调DNMT3b表达减轻P16 CpG岛甲基化,降低P16蛋白表达,诱导Hela细胞凋亡.