miR-145-5p靶向抑制RAD18表达调控替莫唑胺对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

摘要

cqvip:目的探究微小RNA(miR)-145-5p影响替莫唑胺治疗脑胶质瘤疗效的潜在机制。方法选取2012年2月至2017年2月在院接受手术治疗的老年脑胶质瘤60例,实时荧光定量PCR检测患者术后血清miR-145-5p水平,并对患者进行18个月的随访,分析血清miR-145-5p水平与预后的相关性。体外培养人脑胶质瘤细胞系U87MG,分别转染阴性对照、miR-145-5p模拟物与miR-145-5p抑制物。采用MTT法检测各组细胞对替莫唑胺的敏感性;TargetScan在线预测和双荧光素酶报告基因测定分析miR-145-5p靶基因;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;Western印迹检测分析各组细胞凋亡相关蛋白的表达水平。结果血清高miR-145-5p水平组患者的生存率显著高于低miR-145-5p水平组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT结果表明,miR-145-5p可使替莫唑胺的半抑制浓度(IC50)从406μmol/L降低至103μmol/L。TargetScan在线预测和双荧光素酶报告基因检测结果显示,RAD18是miR-145-5p的靶基因。流式细胞术和Western印迹结果表明,miR-145-5p可靶向抑制RAD18表达,并调控凋亡相关蛋白表达水平,进一步促进U87MG细胞凋亡。体内实验结果显示,与阴性对照组〔(2.45±0.33)g〕相比,单独注射替莫唑胺组〔(1.73±0.22)g〕、miR-145-5p组〔(1.91±0.25)g〕及替莫唑胺+miR-145-5p组〔(0.93±0.15)g〕的裸鼠肿瘤质量显著降低,且替莫唑胺+miR-145-5p组的肿瘤质量显著低于替莫唑胺组与miR-145-5p组(P<0.05)。结论miR-145-5p可通过靶向抑制RAD18表达,促进脑胶质瘤细胞凋亡,并增加脑胶质瘤对替莫唑胺的敏感性。