miRNAs对人皮肤成纤维细胞光老化的作用及其相关机制

摘要

目的：探讨miR-146a在紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中的作用。方法10 J／cm2 UVA连续照射成纤维细胞2 w建立光老化模型，分别于首日、37、、14 d提取总RNA，实时定量 PCR检测miR-146a表达量；慢性病毒转染上调 miR-146a 表达（miR1-46 a过表达组），荧光显微镜观察转染效率，并验证细胞内miR-146a表达量；未经处理的成纤维细胞作为空白对照组；UVA＋miR-146a组为miR-146a过表达后再用 UVA照射。MTT法检测四组细胞增殖情况；实时定量PCR检测四组细胞内老化相关基因 mRNA 表达情况；Western 印迹法检测四组细胞中 Smad4蛋白表达情况。结果 UVA照射第3、7、14天UVA照射组miR-146a表达量持续降低，且明显低于同期空白对照组（ P＜0.05）。慢性病毒载体转染后，miR-146a过表达组第7、14天miR-146a表达量明显高于同期空白对照组（P ＜0.05）。 UVA照射组、UVA＋miR-146a组 A值明显低于空白对照组、miR-146a过表达组（P＜0.01）；miR-146a过表达组A值与空白对照组之间无统计学差异（P＞0.05）；UVA＋miR-146a 组 A 值明显高于 UVA 照射组（P＜0.01）。UVA照射组、UVA＋miR-146a组p53、p21、p16 mRNA表达量均明显高于空白对照组、miR-146a过表达组（P＜0.01）；miR-146a过表达组 p53、p21、p16 mRNA表达量与空白对照组之间无统计学差异（P＞0.05）；UVA＋miR-146a组p53、p21、p16 mRNA表达量明显低于UVA照射组（P＜0.01）。 UVA照射组、UVA＋miR-146a组细胞内Smad4蛋白表达量明显高于空白对照组、miR-146a过表达组（P＜0.01）；miR-146a过表达组与空白对照组Smad4蛋白表达量之间无统计学意义（P＞0.05）；UVA＋miR-146a组Smad4蛋白表达量明显低于UVA照射组（P＜0.01）。结论 UVA诱导光老化人皮肤成纤维细胞中miR-146a表达被抑制，上调其表达可抑制Smad4表达，促进光老化细胞增殖，起到抗老化作用。