微小RNA-335调控缺氧复氧诱导下心肌微血管内皮细胞的凋亡

摘要

目的 探讨微小RNA(miRNA)-335对缺氧复氧(H/R)诱导下大鼠心肌微血管内皮细胞(CMEC)凋亡的作用及其机制.方法 建立大鼠CMEC H/R模型.采用体外合成的大鼠miR-335的模拟物和抑制剂,用脂质体转染培养的大鼠CMEC 48 h后,H/R处理细胞.实验分为4组:对照组(CTL组)、H/R组、H/R加miR-335模拟物组(mimic组)、H/R加miR-335抑制剂组(inhibitor组).采用超氧化物阴离子荧光探针法观察细胞内超氧阴离子(O2·-)的变化水平、JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位的变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡.结果 在H/R处理后,H/R组超氧化物歧化酶(SOD2)蛋白表达明显下调,而miR 335的表达明显上调.与CTL组比较,H/R组、mimic组、inhibitor组O2·-水平[(35.23±3.21)％、(46.71±2.58)％、(15.9±2.13)％ vs (4.46±0.98)％,P＜0.01]、细胞凋亡率[(30.46±1.63) ％、(40.21±1.73)％、(17.83±1.45)％ vs (2.14±0.33)％,P＜0.01]明显上升,橙光与绿光比值[(0.47±0.03)、(0.28±0.05)、(0.66±0.03) vs (1.0±0.07),P＜0.01]显著下降.结论 miR-335能够增加氧化应激条件下心肌微血管内皮细胞的凋亡,miR-335通过调控SOD2蛋白的表达,在缺氧复氧介导的线粒体凋亡途径中扮演了关键性的作用.