炎症微环境作用下非经典Wnt/Ca2+信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的影响

摘要

目的:探讨非经典Wnt钙离子信号通路在慢性牙周炎组织来源的牙周膜干细胞中的表达及其对炎症微环境作用下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响.方法:收集解放军总医院口腔科因治疗需要拔除的无龋前磨牙、第三磨牙及慢性牙周炎牙齿,培养正常及炎症微环境下的牙周膜干细胞(H-PDLSCs,P-PDLSCs).成骨诱导3d后采用免疫荧光检测CaMKⅡ在细胞内的表达.H-PDLSCs,P-PDLSCs成骨诱导7d后实时定量PCR检测CaMKⅡ、NLK和Runx2 mRNA表达水平,同时采用Western blot检测两种细胞成骨诱导7d后Runx2、ALP、CaMKⅡ、和NLK的表达.结果:免疫荧光结果显示在H-PDLSCs及P-PDLSCs的对照组中CaMKⅡ均有弱阳性表达,成骨诱导3d后两组细胞中CaMKⅡ的表达增强.实时定量PCR结果显示常规培养条件下CaMKⅡ、Runx2在H-PDLSCs与P-PDLSCs中的表达不存在显著性差异,当成骨诱导后其在两组中的表达量显著增高,但H-PDLSCs组显著高于P-PDLSCs组.P-PDLSCs中NLK的表达水平显著高于H-PDLSCs,成骨诱导后两种组织来源细胞中NLK mRNA的表达水平均有显著性升高但H-PDLSCs组显著高于P-PDLSCs组.非经典信号通路的关键蛋白CaMKⅡ、NLK在成骨诱导7d后其表达水平升高,成骨关键蛋白Runx2及ALP的表达趋势与之一致,但P-PDLSCs低于H-PDLSCs.结论:在慢性炎症微环境中非经典Wnt信号通路参与牙周膜干细胞的成骨分化,Wnt/Ca2+通路中CaMKⅡ、NLK蛋白与干细胞成骨分化正相关.