人端粒相关蛋白HKR3、SMARCB1的筛选及其在胃癌细胞中的表达

摘要

背景：端粒酶与肿瘤的发生有十分密切的联系,研究与人端粒酶逆转录酶(hTERT)相互作用的端粒相关蛋白将有助于了解端粒酶在肿瘤细胞中的生物学特性和分子机制.目的:筛选新的人端粒相关蛋白,为进一步了解端粒酶的全酶结构、生物学特性及其作用机制奠定实验基础.方法:采用酵母双杂交技术进行人端粒相关蛋白分子的筛选.构建诱饵融合蛋白表达载体pGBKT7-hTERT,筛选人睾丸cDNA文库;以蛋白质印迹法测定pGBKT7-hTERT融合蛋白的表达.对筛选得到的阳性克隆质粒进行测序.在GenBank中行同源性比较.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTERT、HKR3、SMARCB1 mRNA在胃癌细胞株SGC-7901中的表达.结果:融合蛋白表达载体pGBKT7-hTERT可在酵母菌株AH109中有效、稳定地表达.cDNA文库筛选获得GenBank已收录的人cDNA序列HKR3和SMARCB1.hTERT、HKR3、SMARCB1 mRNA在胃癌细胞株SGC-7901中表达一致,均呈高表达.结论:HKR3、SMARCB1是人端粒相关蛋白成员.与hTERT有十分密切的联系,可能在胃癌的发生过程中存在相互调节或协同作用.