肝细胞癌高表达基因片段P02的全长RACE扩增和序列分析

摘要

目的扩增肝细胞癌高表达基因基因P02的全长cDNA序列,并利用生物信息学知识对其进行分析,为进一步研究该基因在肝细胞癌发生、发展中的作用奠定基础.方法运用SMART RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术扩增P02的5'和3'末端cDNA,对RACE PCR产物作TA克隆,碱裂解法抽提阳性克隆质粒,酶切和PCR验证目的片断的插入,Sanger双脱氧链中止法测序,利用BLAST、基因探索者等生物学软件对序列进行分析、拼接,获得全长cDNA,利用在线预测软件预测该基因的生物学功能.结果获得865bp的全长cDNA序列,其开放读码框长172个氨基酸,与TPT1基因高度同源,是一个生理功能尚未完全明了、与生长相关的蛋白质,蛋白质结构和功能预测提示:该基因产物可能是一个位于细胞膜的与生长相关的裂解酶.结论在肝细胞癌组织中成功克隆扩增了长865bp的P02全长cDNA序列,为进一步功能研究奠定基础.