一种复合miRNAs检测体系的构建及在体液组织属性来源鉴定中的应用研究

摘要

目的 选取5种常见体液的10条特异性miRNAs基因,通过逆转录-终点法PCR技术构建复合扩增体系,并对体系的灵敏度进行测试,之后使用该体系检测静脉血、精液、月经血、唾液和阴道分泌液中miRNAs的表达情况.方法 首先设计10条miRNAs标记的逆转录引物和cDNA扩增引物,构建10个标准miRNAs标记的荧光复合体系,并进行灵敏度测试.然后使用miRNeasy Mini Kit (QIAGEN)提取体液样本的RNA,运用荧光复合体系进行检测,并对检测结果进行分析.结果 本研究得到10个标准miRNAs标记的分型结果,标准miRNAs标记的荧光复合体系的检测灵敏度为总miRNAs模板量≥1ng.静脉血样本10条miRNA检测结果:miR-451、miR-144-3p、miR-144-5p,峰值在3 000～7 000 rfu之间;月经血样本分型结果:miR-214、miR-451、miR-144-3p、miR-205-5p、miR-203-3p,峰值在800～7 000 rfu之间;阴道分泌物样本分型结果:miR-144-3p、miR-203-3p, miR-205-5p,峰值在600～3 000rfu之间.唾液样本分型结果:miR-451、miR-144-3p、miR-205-5p、miR-203-3p,峰值在600～7 000 rfu之间;精液样本分型结果:miR-888、miR-144-3p、miR-891a,峰值在1 000～7 000 rfu之间.结论 本研究建立的该体系能够对5种法医学常见体液(静脉血、唾液、精液、月经血和阴道分泌物)进行区分鉴定,为犯罪现场体液斑痕鉴定提供了新的检测方法.