PCR-DGGE法检测浮游生物16S rDNA在溺死鉴定中的应用

摘要

目的 建立并评估PCR-DGGE法检测浮游生物对溺死鉴定的应用价值.方法 大白兔30只随机分为3组:溺死组(n=12),死后抛尸组(n=12)和对照组(n=6);溺死组和死后抛尸组又分为2个亚组:东湖水域组(n=6)和墨水湖水域组(n=6).死后提取心血和肺、肝、肾、脑等组织,匀浆后,采用Percoll密度梯度离心法分离浮游生物并提取其DNA,PCR扩增浮游生物特异的16S rDNA片段后分别用琼脂糖凝胶电泳及DGGE检测分析.2个溺死案例检材同法检验.结果 溺死组各组织器官中浮游生物检测多呈阳性:肺(100%)、肝(83%)、肾(75%)、心血(83%)、脑(42%);死后抛尸组仅2例肺组织(16.7%)检出阳性;对照组全部阴性.溺尸肺组织DGGE分型网谱与相应溺死点水样分型图谱相似,而与非溺死点水样分型结果差异显著.2实际案例均呈阳性.结论 本方法不仅有助于定性诊断溺死,而且通过比较产物的多样性可以推断溺死地点,在法医学溺死鉴定中具有较大实用价值.