基于测序的肝细胞癌血浆外泌体微小RNA-1248的差异表达及功能分析

摘要

目的筛选血浆外泌体微小核糖核苷酸（microRNA）作为肝细胞癌（HCC）的诊断标志物,并分析候选miRNA在HCC进展中可能发挥的作用。方法 2018年10月至2019年2月收集12例于广州市第一人民医院初诊为"HCC"的患者及12例健康志愿者血浆样本,利用超速离心法收集血浆外泌体,经动态光散射法及蛋白质免疫印迹法鉴定后,提取RNA进行测序。通过定量聚合酶链反应（qPCR）验证候选外泌体miRNA差异表达量,使用t检验分析各miRNA表达量差异。通过生物信息学方法预测候选miRNA的靶基因及可能调控的通路,分析其在HCC进展过程中发挥的作用,组间比较采用t检验。结果以差异表达倍数2倍以上（Fold change＆2.0或＆0.5,且P＆0.05）作为标准,分别比较HCC患者术前、术后及健康志愿者血浆外泌体miRNA的差异表达结果,结合两次结果,筛选表达同时上/下调miRNA共12个。其中,表达上调6个（miR-2115-3p、miR-214-3p、miR-511-5p、miR-1299、miR-10a-5p、miR-375-3p）,表达下调6个（miR-219a-2-3p、miR-127-3p、miR-9-5p、miR-383-5p、miR-212-5p、miR-1248）。qPCR验证候选miRNA在HCC患者及健康志愿者血浆外泌体中的表达差异,HCC组miR-1248表达低于健康志愿者组（9.046 ΔCt比7.597 ΔCt,t=2.849,P＆0.05）。结论血浆外泌体miR-1248有作为HCC的诊断标志物的潜力。血浆外泌体miR-1248可通过调控受体细胞的细胞外基质受体相互作用、介导代谢重编程抑制HCC进展。