佛波醇下调丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路抑制破骨细胞分化

摘要

目的探讨佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯（PMA）对破骨细胞分化的影响及作用机制。方法提取雄性,4周龄C57小鼠原代骨髓单核细胞（BMM）,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测100 ng/ml PMA刺激后BMM活性;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及骨吸收陷窝实验检测100 ng/ml PMA对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及蛋白质印迹法（Western blot）检测分析PMA对破骨细胞分化相关指标TRAP、RANK、Cathepsink、基质金属蛋白酶（MMP）-9、TRAF-6、C-SRC的影响;Western blot检测分析PMA对丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路相关蛋白的影响,探讨可能作用机制;组间比较采用t检验。结果 100 ng/ml PMA刺激BMM 24 h和48 h促进细胞增殖（24 h吸光度值0.39±0.05比0.27±0.06,t=20.830,P＆0.01;48 h吸光度值0.53±0.03比0.32±0.03,t=11.860,P＆0.01）,刺激72 h与对照组比较细胞增殖差异无统计学意义（72 h吸光度值0.24±0.03比0.21±0.02,t=1.548,P＆0.05）;PMA干预组形成的破骨细胞数量低于对照组（11.74±0.06比24.63±0.44,t=57.120,P＆0.01）,骨吸收陷窝面积低于对照组,骨吸收功能低于对照组（9.90±0.11比18.92±0.28,t=55.800,P＆0.01）,破骨分化相关基因及蛋白TRAP、RANK、Cathepsink、MMP-9、TRAF-6、C-SRC表达低于对照组,与对照组比较差异有统计学意义（P＆0.05）;Western blot结果中显示以100 ng/ml PMA预孵育1 h即可阻断MAPK/ERK信号通路相关蛋白p44/42MAPK、JNK的磷酸化。结论 PMA通过下调MAPK/ERK信号通路抑制BMM破骨细胞分化。