含有WW结构域的氧化还原酶的基因在骨肉瘤组织中表达的临床意义及其对骨肉瘤的调控作用

摘要

目的探讨含有WW结构域的氧化还原酶的基因（WWOX）在骨肉瘤组织中的表达与患者临床病理特征的相关性,研究WWOX在小鼠中对人骨肉瘤生长和转移的影响及其分子机制。方法收集2011年1月至2018年12月来自郑州大学第一附属医院的骨肉瘤患者112例,采用免疫组织化学和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测骨肉瘤组织中WWOX的表达,并分析WWOX表达与骨肉瘤临床病理特征之间的关系,然后建立人骨肉瘤免疫缺陷鼠荷瘤模型,分别注射空白载体、慢病毒载体的WWOX和慢病毒载体的WWOX短发卡RNA（shRNA）,比较3组免疫缺陷鼠肿瘤体积变化,荷瘤标本用qRT-PCR和蛋白质印迹法（Western blot）评估WWOX在小鼠原位瘤和肺转移瘤中的表达情况,CT分析肺转移情况。Western blot检测WWOX敲低组与对照组比较相关蛋白的表达量变化。对计量资料符合正态分布的使用独立样本t检验进行差异分析,不符合正态分布的使用非参数检验进行差异分析,等级资料使用非参数检验进行差异分析,计数资料使用检验进行差异分析。不同组之间的差异采用one-way ANOVA方法分析。结果 WWOX的表达与患者年龄、性别和发病部位等临床病理特征无关,而WWOX高表达与较低的微血管密度（MVD）（P＆0.05）和较小的肿瘤体积明显相关（P＆0.05）。此外,WWOX高表达患者的总生存期（OS）和无病生存期（DFS）均好于WWOX低表达患者（P值均＆0.05）,差异有统计学意义。瘤内注射WWOX的小鼠原位肿瘤WWOX表达与对照组和GDPAH的比值分别为1.43±0.17和2.31±0.26,表达明显高于对照组,MVD分别为19.34±3.71与11.71±1.72,表达明显低于对照组,肿瘤生长缓慢,肺转移瘤肿瘤个数、WWOX表达和MVD与对照组差异无统计学意义,瘤内注射WWOX shRNA的小鼠原位肿瘤WWOX表达和GDPAH的比值为0.76±0.19,表达明显低于对照组,MVD为28.50±3.44,表达明显高于对照组,肿瘤生长加快,肺转移瘤数量为13.00±4.19,表达明显高于对照组,WWOX表达降低,MVD增加。进一步发现WWOX可通过细胞外信号调节激酶（ERK）的磷酸化调节细胞核增殖抗原（Ki-67）及基质金属蛋白酶（MMP）-2的表达,并进一步调控骨肉瘤的增殖与侵袭。结论 WWOX在骨肉瘤中高表达与较好的预后相关,WWOX可以通过ERK信号通路抑制骨肉瘤免疫缺陷鼠荷瘤的生长,抑制骨肉瘤免疫缺陷鼠荷瘤的血管生成和肺转移。