腺病毒介导的B细胞淋巴瘤/白血病-xL基因修饰骨髓间充质干细胞对大鼠膝关节软骨缺损的修复作用

摘要

目的 观察腺病毒介导的B细胞淋巴瘤/白血病-xL（bcl-xL）基因修饰骨髓间充质干细胞（BMSCs）对大鼠膝关节软骨缺损的修复作用。方法 构建腺病毒介导的bcl-xL基因过表达载体pAdTrack-bcl-xL,分离大鼠BMSCs并培养扩增,转染pAdTrack-bcl-xL及空白载体,实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测细胞bcl-xL表达水平。将50只SD大鼠随机分成5组（n＝10）,对照组不做任何处理,模型组、BMSCs治疗、转染空载体的BMSCs治疗组和bcl-xL过表达的BMSCs治疗组均制作膝关节软骨缺损模型并在术后3 d进行相应治疗。治疗后6周和12周后处死各组大鼠,采集膝关节,制作石蜡切片,后分别采用苏木精-伊红（HE）、Masson以及番红素-O法对膝关节软骨组织进行染色观察。结果 与空载体组比较,pAdTrack-bcl-xL组BMSCs中bcl-xL基因在mRNA水平上相对表达量显著增加（1.07±0.08比8.15±0.31,t＝－52.893,P＆0.01）,提示成功构建bcl-xL基因稳定过表达的BMSCs。治疗6周后,与模型组比较,BMSCs组及转染空载体的BMSCs治疗组大鼠膝关节有大量软骨形成、软骨细胞排列趋于整齐、软骨细胞数量明显增加；而与空载体的BMSCs治疗组比较,bcl-xL过表达的BMSCs治疗组大鼠膝关节有更多软骨形成、软骨细胞排列更整齐、软骨细胞数量大大增加。与同组6周时比较,各治疗组大鼠12周时的软骨形成更加明显,尤以bcl-xL过表达的BMSCs治疗组最为突出。结论 bcl-xL过表达的BMSCs能显著促进大鼠膝关节软骨缺损的修复。