过表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5对肺腺癌上皮-间充质转化的影响及临床意义

摘要

目的观察磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5（GPC5）对肺腺癌细胞上皮-间充质转化（EMT）过程的影响,并探讨其与EMT关键蛋白在人肺腺癌组织中的临床表达相关性。方法构建以慢病毒为载体、荧光素酶标记的过表达GPC5的稳转肺腺癌A549细胞株（OE-GPC5）及阴性对照组（NC组）,采用Western blot法比较两组间EMT相关蛋白上皮型钙黏附蛋白（E-cadherin）、碱性螺旋-环-螺旋转录因子1（Twist1）、波形蛋白（Vimentin）、神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）的表达水平差异;应用免疫荧光法检测EMT转化生长因子-β（TGF-β）10 ng/ml干预36 h后两组间E-cadherin和Vimentin的表达水平;在134例肺腺癌组织中,采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）方法检测标本中GPC5、E-cadherin、Vimentin基因mRNA的表达水平,并运用Pearson法进行临床表达相关分析。结果过表达GPC5可上调A549细胞株中E-cadherin的蛋白表达水平（P=0. 008）,而下调Vimentin（P=0. 012）,N-cadherin（P=0. 001）和Twistl （P=0. 001）的蛋白表达水平;免疫荧光实验结果显示在TGF-β干预后过表达GPC5组的E-cadherin的绿色荧光强度较NC组有所增强（P=0.020）,而Vimentin的绿色荧光强度较NC组明显减弱（P=0. 001）;Pearson相关分析结果表明在人肺腺癌组织中GPC5与E-cadherin的mRNA表达呈正相关（P=0. 007）,而与Twist1的mRNA表达呈负相关（P=0. 023）。结论 GPC5可能通过逆转肺腺癌的EMT过程发挥抑癌基因的作用。