转化生长因子-β1对人支气管上皮细胞间充质转化及Six1基因表达影响的研究

摘要

目的:探讨TGF-β1对人支气管上皮细胞间充质转化及Six1基因表达的影响。
　　方法:体外培养人支气管上皮细胞（16HBE），构建上皮-间充质转化模型。采用倒置显微镜观察各组细胞形态的变化；采用Real-time PCR检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、α-肌动蛋白、纤维黏连蛋白及Six1基因 mRNA表达的情况；采用Westernblotting检测E-钙黏素、波形蛋白、α-肌动蛋白、纤维黏连蛋白及Six1蛋白的表达变化。
　　结果:1.倒置显微镜结果示:对照组细胞呈单层，细胞间连接较为紧密；处理组A细胞形态变化不明显；处理组B部分细胞出现肥大、拉长，细胞间连接紧密性下降；处理组C细胞形态变化较为明显，呈梭行，同时细胞间隙增大，丧失典型的铺路石样特征。
　　2.RT-PCR检测结果示：对照组细胞可正常表达E-钙黏素基因、波形蛋白基因、纤维黏连蛋白基因、α-肌动蛋白基因及Six1基因 mRNA；与对照组相比较，处理组A其E-钙粘素基因、α-肌动蛋白基因mRNA表达量降低（P值分别为0.862、0.566，均＞0.05），Six1基因mRNA表达量增高（P值为0.102＞0.05），差异均无统计学意义，波形蛋白基因、纤维黏连蛋白基因 mRNA表达量显著升高（P值分别为0.003、0.006＜0.01），差异有统计学意义。处理组B其E-钙粘素基因mRNA表达量明显减少（P=0.042），波形蛋白基因、纤维黏连蛋白基因、α-肌动蛋白基因及Six1基因 mRNA表达量均显著增加（P=0.000、0.001、0.031、0.023，均小于0.05），与对照组相比差异均有统计学意义。处理组C其E-钙粘素基因mRNA表达量显著减少（P=0.004＜0.01），波形蛋白基因、纤维黏连蛋白基因、α-肌动蛋白基因及Six1基因 mRNA表达量均明显增加（P=0.004、0.003、0.023、0.004，均小于0.05），与对照组相比差异均有统计学意义。
　　3.Westernblot检测结果示：对照组细胞能够正常表达E-钙粘素、α-肌动蛋白、纤维黏连蛋白、波形蛋白及Six1蛋白。与对照组相比，处理组A细胞中E-钙粘素表达减少（P=1.023＞0.05），α-肌动蛋白、纤维黏连蛋白及波形蛋白的表达量增高（P值分别为0.789、0.542、0.624，均＞0.05），但差异均无统计学意义，Six1蛋白表达量增加（P=0.028＜0.05），差异有统计学意义；处理组B细胞中E-钙粘素表达量明显减少（P=0.011＜0.05），α-肌动蛋白、纤维黏连蛋白、波形蛋白及Six1蛋白的表达量均显著增加（P值分别为0.002、0.001、0.004、0.009均＜0.01），与对照组相比差异均有统计学意义；处理组C细胞中E-钙粘素表达量显著减少（P=0.009＜0.01），α-肌动蛋白、波形蛋白及Six1蛋白的表达量显著增加（P值分别为0.008、0.003、0.007，均＜0.01），纤维黏连蛋白表达量明显增加（P值为0.017＜0.05），与对照组相比差异均有统计学意义。且随TGF-β1作用时间越长，Six1蛋白表达越高，各组间有显著性差异（F=33.50）。
　　结论:TGF-β1可能通过上调Six1的表达诱导气道上皮细胞间充质转化，从而参与哮喘气道重塑。

目录

引言

材料与方法

1 主要试剂及来源

2 主要仪器及来源

3 主要溶液配制

实验方法

4 支气管上皮细胞的传代培养

5 实验分组

6 倒置显微镜观察各组细胞形态

7 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测16HBE细胞各表型标志物及Six1基因 mRNA表达水平

8 Western blotting检测支气管上皮细胞16HBE细胞各表型标志物及Six1蛋白的表达水平

9 统计学方法

结果

1 细胞形态改变

2 PCR扩增曲线和溶解曲线

3 细胞表型标志物基因及Six1基因mRNA在16HBE细胞的表达情况

4 细胞表型标志物蛋白及Six1蛋白在16HBE细胞的表达情况

讨论

结论

参考文献

综述:转录因子在上皮-间充质转化中分子机制的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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