顺序特异性引物法检测胰腺穿刺物及胰液中K-ras基因点突变

摘要

@@ 自1994年以来，我们采用多聚酶链反应-顺序特异性引物（PCR-SSP）检测胰腺癌细针穿刺组织及胰液中K-ras基因第12位密码子有无突变及突变方式，现报道如下。rn 一、对象与方法rn 1.标本来源：自1994年1月至1996年12月，行病变组织细针穿刺共88例，其中胰腺癌35例，慢性胰腺炎20例，壶腹癌8例，胆管癌7例，胰岛素瘤6例及正常胰腺组织12例。采用内窥镜逆行胰胆管造影或术中胰管穿刺或术后外引流收集到胰液47份，其中胰腺癌17例，慢性胰腺炎17例，胰岛素瘤、壶腹癌、胆管癌各3例及胰腺外伤4例。穿刺物或胰腺离心沉淀物用蛋白酶K裂解液裂解，上清液用作PCR模板。50 μl反应体系中含50 mmol/L KCl、10 mmol/L Tris-HCl、pH 8.5、1.8 mmol/L MgCl2 ,引物浓度各1.0 μmo1/L,4种dNTP浓度各200 μmo1/L,Taq DNA聚合酶1.5 U。每一体系：94℃45 s变性，55 ℃45 s退火，72 ℃ 45 s延伸，共35个循环。扩增产物用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴乙啶染色，紫外灯下观察。