一种同时分离肝细胞和储脂细胞的简易方法

摘要

目的探讨同时分离肝细胞和储脂细胞的有效方法.方法采用门静脉胶原酶灌注消化法同时分离大鼠肝细胞和储脂细胞,先用300r/min(20℃)低速离心5 min,将细胞悬液分成上清和沉淀两部分并分别放入两个离心管中.A管为沉淀部分(肝细胞悬液)经0.02%胶原酶孵育液孵育10min(37℃ 5%CO2),100目网过滤,离心后即为肝细胞.B管为上清部分主要是储脂细胞,经胶原酶恒温震荡消化(200r/min,37℃),200目网过滤,Nycodenz液进行梯度离心(3 000r/min)后即得储脂细胞.结果肝细胞存活率和细胞产率分别为 (93.5± 3.5)%和 (2.4± 0.2)×108/大鼠,储脂细胞分别为 (94.5± 3.5)%和 (2.3± 0.4)×107/大鼠.肝细胞组织学及组织化学检测肝细胞形态正常,细胞培养功能表达正常.储脂细胞在激发波长为328 nm的荧光显微镜下发出蓝绿色荧光,细胞培养贴壁良好.结论一步法同时分离肝细胞和储脂细胞是一种简单有效的方法.