GFAP启动子与骨髓基质干细胞神经胶质分化的筛选

摘要

目的研究骨髓基质干细胞体外诱导分化,结合特异性GFAP启动子控制的EGFP的表达来筛选诱导的骨髓基质干细胞.方法构建报告载体pGFAP-EGFP,原代培养的骨髓基质干细胞,在β-ME、RA、forskolin、bFGF、PDGF-AA、HRG-β等复合物的诱导7d后,pGFAP-EGFP载体转染,G418抗生素筛选.荧光显微镜下观察存活细胞体内的EGFP表达情况,流式细胞仪测定荧光细胞的比率.结果报告载体pGFAP-EGFP构建成功,转染骨髓基质干细胞后部分细胞存活,流式细胞仪测定82.74%的细胞表达EGFP.筛选出的细胞GFAP免疫细胞化学鉴定阳性.体外扩增后可以得到大量的目的细胞.结论特异性GFAP 启动子控制的EGFP的表达可以在体外有效的进行骨髓基质干细胞的筛选和扩增.筛选后的细胞具有胶质细胞表型,可提供足够的胶质细胞进行神经系统的细胞替代治疗.