人柯萨奇-腺病毒受体基因真核表达载体的构建及在膀胱肿瘤细胞中的表达

摘要

＜正＞我们通过本实验构建含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的高效、双向真核表达载体pIRES2-EGFP-hCAR,并以阳离子脂质体介导法转染人膀胱癌细胞,研究EGFP与柯萨奇腺病毒受体基因（CAR）蛋白在膀胱肿瘤中高效的表达。一、材料和方法1．材料：pIRES2-EGFP购自美国BD公司。pTOPOCAR（含有1．17 kb的人CAR cDNA）、兔抗人CAR抗体及鼠抗人CAR抗体由美国德州大学西南医学中心Hsieh JT教授惠赠,大肠杆菌DH5α、膀胱癌细胞株J82由本研究所保存。各种工具酶、DNA回收试剂盒购自大连TaKaRa公司,质粒提取试剂盒购自德国Qiagen公司,Lipofectamine2000购自In- vitrogen公司,G418购自Gibco公司。