RNA干扰靶向抑制表皮生长因子受体表达对大肠癌细胞增殖的影响

摘要

目的观察RNA干扰（RNAi）技术能否有效抑制大肠癌LoVo细胞株表皮生长因子受体（EGFR）的表达以及对细胞增殖的影响。方法构建质粒表达载体pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2；脂质体瞬时转染后24、48、72、96、144 h实时荧光定量PCR（Real Time PCR）和Western blot检测EGFR表达,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,并绘制细胞生长曲线；分5组：A组：LoVo细胞组；B组：Lipofectamine2000组；C组：对照载体HK组；D组：pU6-EGFR-shRNA-1组；E组：pU6-EGFR-shRNA-2组。结果D组E组细胞转染shRNA后mRNA和蛋白表达降低,G0～G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞凋亡率增加,对数生长期延迟,以48 h效果最显著,和A组B组C组比较差异有统计学意义（P＜0．05）；但随着时间的推移其干扰作用降低。结论两条EGFR-shRNA均可有效抑制大肠癌LoVo细胞EGFR表达,阻滞更多的细胞位于G0～G1期,促进细胞凋亡而抑制细胞增殖。