利用RNA干扰技术抑制Galectin-3的表达对人大肠癌细胞系Lovo增殖和凋亡的影响

摘要

目的：研究galectin-3表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为肿瘤基因治疗的方法。 方法：实验于2005年6月～2006年12月在南方医院消化研究所完成。用化学合成的方法构建galectin-3干扰片断并顺势转染大肠癌细胞系Lovo,用未转染细胞做为正常对照,以转染阴性干扰片断作为阴性对照,免疫印记法验证干扰结果,MTT方法研究干扰前后细胞增殖,流式细胞仪检测干扰前后细胞凋亡情况。 结果：用顺势转染的方法成功转染了Gal-3siRNA片断,转染后72 h收集细胞并提取细胞浆蛋白,免疫印记法验证结果显示阳性干扰后灰度值(55.790)与未干扰(97.234)及阴性干扰的灰度值(90.459)相比,galectin-3表达明显减弱(P＜0.05)。分别在干扰后24h,48h和72 h检测细胞增殖发现干扰后细胞继续生长,但细胞生长减慢,F=149.710,P=0.000；干扰组与未干扰和阴性干扰相比,P值均=0.000,但后两组比较,P=0.0750,.用流式细胞仪检测发现galectin-3在细胞各期都有凋亡,凋亡中晚期多于早期,但两组比较,P=0.210.正常组,阴性对照组和galectin-3干扰组相比,阳性干扰后细胞凋亡增加,后组与前两组相比,F=27.185,P值分别为0.000,0.000,但后两组比较,F=0.890,P=0.587. 结论：成功转染并抑制了galectin-3在大肠癌细胞系lovo中的表达,干扰后增殖减慢,凋亡增加.