四聚功能域提高前列腺特异抗体亲和力的作用

摘要

目的探讨人p53四聚功能域在提高抗前列腺特异抗原（PSA）／抗人CD3双特异性单链抗体（scFv）亲和力方面的作用。方法利用递归聚合酶链反应（PCR）法扩增人IgG3上游铰链区与人p53四聚功能域融合基因,克隆入pUC19载体中构建pUC19／IgG3／p53克隆载体。将抗 PSA／CD3双特异性scFv克隆入pUC19／IgG3／p53载体中,构建多价抗PSA/CD3双特异性scFv融合基因。将融合基因克隆入真核表达载体pSeeTag2-B中,转染HeLa细胞进行表达,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果获得了多价抗PSA/CD3双特异性scFv融合基因,基因全长1638 bp,可编码546个氨基酸,与已发表的抗PSA／CD3双特异性scFv和人p53四聚功能域基因cDNA序列一致。表达产物经SDS-PAGE和Western印迹实验证实为约67×103的特异蛋白条带,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合PC-3细胞和人外周血单个核细胞（PBMC）,亲和力高于双特异性scFv。结论人IgG3上游铰链区／p53四聚功能域基因与抗PSA／CD3双特异性 scFv基因融合后表达产物的功能性亲和力大大提高,为提高抗体的功能性亲和力开辟了新的思路。