声明
第1章 文献综述
1.1 前言
1.2 CD47与纳米抗体简介
1.2.1 CD47与其研究进展
1.2.2 纳米抗体简介
1.3 同源建模的原理和方法
1.4 纳米抗体亲和力成熟
1.4.1 体内亲和力成熟的策略
1.4.2 体外亲和力成熟的策略
1.4.3 体外亲和力成熟的技术
1.4.4 纳米抗体的体外亲和力成熟
1.5 本课题的主要研究内容
第2章 纳米抗体的同源建模及分子动力学模拟
2.1 引言
2.2 同源建模的基本过程
2.2.1 选择模板
2.2.2 序列比对
2.2.3 模型初步构建及初步优化
2.2.4 模型选择及评估
2.3 分子动力学模拟的基本过程
2.3.1 模拟参数设置
2.3.2 数据分析
2.4 结果与讨论
2.4.1 选择模板
2.4.2 序列比对
2.4.3 模型初步构建及优化
2.4.4 模型选择
2.4.5 模型评估
2.4.6 分子动力学模拟
2.5 小结
第3章 分子对接及体外亲和力成熟
3.1 引言
3.2 分子对接的基本过程
3.2.1 模拟参数设置及过程
3.2.2 模型选择
3.3 体外亲和力成熟的基本过程
3.3.1 突变位点的确定
3.3.2 虚拟文库的构建及分子预处理
3.3.3 突变体获得及打分函数评价
3.3.4 虚拟文库的筛选
3.4 结果与讨论
3.4.1 分子对接及模型选择
3.4.2 突变位点的确定
3.4.3 虚拟文库的构建及分子预处理
3.4.4 突变体获得及打分函数评价
3.4.5 理想突变体的获得
3.5 小结
第4章 纳米抗体功能性的鉴定
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验所用抗原、质粒载体及菌株
4.2.2 实验主要试剂
4.2.3 实验主要仪器
4.2.4 溶液及培养基的配制
4.3 实验方法
4.3.1 纳米抗体的表达与纯化
4.3.2表面等离子体共振验证纳米抗体的抗原结合活性
4.3.3荧光实时定量PCR验证纳米抗体的热稳定性
4.3.4 间接法 ELISA验证纳米抗体的结合活性
4.3.5 间接法 ELISA验证纳米抗体的热稳定性
4.3.6 突变体结构分析
4.4 结果与讨论
4.4.1 特异性纳米抗体的表达与纯化
4.4.2表面等离子体共振验证纳米抗体的抗原结合活性
4.4.3 荧光实时定量 PCR验证纳米抗体热稳定性
4.4.4 间接法 ELISA验证纳米抗体的结合活性
4.4.5 间接法 ELISA验证纳米抗体的热稳定性
4.4.6 突变体结构分析
4.5 小结
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 创新点
5.3 展望
参考文献
附录
发表论文和参加科研情况说明
致谢
天津大学;
