小鼠成纤维活化蛋白真核表达载体的构建及表达

摘要

目的构建小鼠成纤维活化蛋白（FAP）基因的真核表达载体,并检测其在人胚肾细胞及小鼠体内的表达。方法根据Gene Bank中mFAP基因（NM007986）全序列设计聚合酶链反应（PCR）引物,获得其开放式阅读框（ORF）。将目的基因片段克隆至真核表达载体pcDNA6/myc-His-B,转化并筛选。将重组质粒注射入小鼠尾静脉,在注射后1、3、5、7 d抽提小鼠腓肠肌组织的总RNA,检测FAP表达。结果经过酶切鉴定、测序比对,确定所筛选的阳性克隆为pcDNA6-mFAP重组子,其可在真核细胞及小鼠体内正常表达,并产生相应蛋白质产物。在小鼠体内注射后第5天,重组子的基因（0.841±0.040）和蛋白表达量（85.380±4.425）%最高,和空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。结论成功构建FAP真核表达载体,为研究该基因产物的功能和进行疫苗抗肿瘤实验提供基础。