静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米材料与小鼠胚胎肝细胞生物相容性的研究

摘要

目的探讨小鼠胚胎肝细胞与静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸（PLGA）-聚乙二醇（PEG）共聚物纳米材料的体外生物相容性。方法采用胰酶分步消化法分离培养孕16 d昆明小鼠胚胎肝细胞并进行免疫荧光鉴定;使用静电纺丝法制备PLGA和PLGA-PEG纳米材料;取第5代胚胎肝细胞分别接种于PLGA和PLGA-PEG纳米纤维材料上, 进行体外培养, 细胞计数试剂盒（CCK-8）法测定两种材料的细胞毒性及细胞在材料表面的黏附、增殖;扫描电镜（SEM）观察材料结构、细胞复合材料的形态。结果体外分离培养的小鼠胚胎肝细胞呈单层多边形样生长, 免疫荧光检测胚胎肝细胞角蛋白18（CK18）和甲胎蛋白（AFP）表达阳性;CCK-8检测显示PLGA（0.255±0.062、0.259±0.039、0.239±0.029、0.257±0.026）和PLGA-PEG（0.293±0.033、0.283±0.200、0.249±0.021、0.244±0.025）两种纳米材料与空白对照组（0.258±0.017）比较均无明显的细胞毒性（P＆0.05）。小鼠胚胎肝细胞在材料表面生长良好, PLGA-PEG组（0.113±0.005、0.234±0.008、0.678±0.006、1.108±0.004、1.182±0.004、1.114±0.011）及PLGA组（0.108±0.005、0.206±0.010、0.502±0.009、0.817±0.005、0.807±0.007、0.819±0.005）吸光度（A）值均随时间延长而增大。两组A值在各时间点差异均有统计学意义（P＆0.05）。各时间点两组材料的细胞黏附率差异有统计学意义, PLGA-PEG组（21.250±2.165、51.250±7.806、75.000±3.750）明显高于PLGA组（15.000±3.750、38.750±7.806、65.000±4.330, P＆0.05）。SEM结果显示, 与PLGA组比较, PLGA-PEG组中小鼠胚胎肝细胞更易于黏附生长。结论静电纺丝法制备的PLGA-PEG纳米材料具有良好的细胞生物相容性, 安全无毒, 适宜胚胎肝细胞生长。