CXC趋化因子配体12及其CXC趋化受体4/7在肝硬化脾亢大鼠脾脏组织中的表达及意义

摘要

目的探讨CXC趋化因子配体12（CXCL12）及其CXC趋化受体4/7（CXCR4/7）在肝硬化脾亢大鼠模型巨脾组织中的表达及意义。方法将50只雄性SD纯系大鼠,随机分成模型组（n=40）和对照组（n=10）。对照组采用0.9%生理盐水灌胃,剂量为0.3 ml/100 g,每周2次,共8周;模型组则采用40%四氯化碳（CCL4）花生油溶液灌胃,剂量0.3 ml/100 g,每周2次,共8周。经病理学和血常规检查证实制成肝硬化脾亢模型后,用Masson三色染色观察脾脏组织纤维化程度,用免疫组织化学,Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）三方法检测脾脏组织中趋化轴CXCL12-CXCR4/CXCR7的表达水平,并与对照组进行比较。结果 Masson三色染色显示:肝硬化脾亢大鼠脾脏纤维面积[（11.17±4.85）%]显著高于对照组[（2.83±0.90）%],两组比较差异有统计学意义（t=7.939,P=0.000）。模型组脾脏指数[（3.14±0.98）mg/g]高于对照组[（2.33±1.03）mg/g],两者比较差异有统计学意义（t=2.351,P=0.025）。免疫组织化学检测:模型组CXCL12、CXCR4及CXCR7的平均吸光度值分别为（8.89±4.89）×10-3、（8.78±4.67）×10-3、（8.47±3.97）×10-3,显著高于对照组（2.89±1.11）×10-3、（2.03±0.45）×10-3、（1.81±0.69）×10-3,差异有统计学意义（t=4.126,P=0.001;t=4.973,P=0.000;t=5.644,P=0.000）;模型组CXCL12、CXCR4及CXCR7阳性细胞率分别为（31.02±9.03）%、（33.22±8.31）%、（28.89±8.40）%,显著高于对照组（20.62±8.88）%、（18.81±6.23）%、（10.49±2.99）%,差异有统计学意义（t=3.112,P=0.004;t=4.170,P=0.001;t=6.293,P=0.000）。Western blot检测:模型组CXCL12、CXCR4及CXCR7蛋白相对表达量分别为1.71±0.98、1.01±057、1.15±0.77,显著高于对照组0.39±0.13、0.32±0.11、0.51±0.31,差异有统计学意义（t=6.366,P=0.000;t=5.550,P=0.000;t=3.348,P=0.002）。RT-qPCR检测:模型组CXCL12、CXCR4及CXCR7 mRNA相对表达量分别为3.48±0.90、1.99±0.34、2.53±0.59,显著高于对照组1.05±0.10、1.00±0.18、1.02±0.02,差异有统计学意义（t=9.607,P=0.000;t=10.460,P=0.000;t=9.259,P=0.000）。Pearson相关分析显示:,CXCL12蛋白相对表达量（1.31±1.02）、CXCR4的蛋白相对表达量（0.80±0.57）、CXCR7的蛋白相对表达量（0.96±0.72）与脾脏纤维面积（8.65±5.62）%呈正相关（r=0.688,P=0.001;r=0.711,P=0.001;r=0.579,P=0.009）。CXCL12 mRNA相对表达量（2.74±1.37）、CXCR4 mRNA相对表达量（1.69±0.55）、CXCR7 mRNA相对表达量（2.07±0.87）、与脾脏纤维面积（8.65±5.62）%呈正相关（r=0.694,P=0.001;r=0.647,P=0.003;r=0.609,P=0.006）。结论CCL4致肝硬化脾亢大鼠巨脾中CXCL12-CXCR4/CXCR7的表达异常增高,且与脾脏纤维面积呈正相关,可能参与了肝硬化脾亢大鼠脾脏纤维化的过程。