小干扰RNA沉默表皮生长因子受体对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

摘要

目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默表皮生长因子受体（EGFR）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和迁移的影响及其机制。方法分离、培养大鼠VSMC,取对数生长期细胞,利用慢病毒载体感染VSMC,将细胞分为siRNA-EGFR组、siRNA-阴性对照组和空白对照组,5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-BrdU）法检测各转染组细胞增殖能力,Transwell小室和划痕实验检测各转染组细胞迁移能力,实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测各转染组细胞中EGFR、细胞外信号调节激酶（ERK）、c-jun氨基末端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）基因表达,Western blot法检测各转染组细胞中EGFR、磷酸化ERK（p-ERK）、磷酸化JNK（p-JNK）和磷酸化p38（p-p38）蛋白表达。结果siRNA-EGFR组VSMC迁移细胞数[（48.5±6.1）个],均显著低于siRNA-阴性对照组和空白对照组,分别为（86.2±7.2）个和（88.3±7.6）个,差异均有统计学意义（F=37.261,P=0.000）,与0 h比较,24 h后,siRNA-EGFR组VSMC迁移率为（35.7±3.8）%,显著低于siRNA-阴性对照组和空白对照组,分别为（74.2±5.7）%和（75.5±6.1）%,差异均有统计学意义（F=40.315,P=0.000）;siRNA-EGFR组细胞中ERK、JNK和p38 mRNA相对表达量（0.53±0.09、0.47±0.11、0.41±0.07）均低于siRNA-阴性对照组（0.82±0.12、0.64±0.10、0.68±0.09）和空白对照组（0.85±0.14、0.66±0.13、0.70±0.12）,差异均有统计学意义（F=15.391、12.817、11.264,P=0.000、0.000、0.000）;siRNA-EGFR组细胞中p-ERK、p-JNK和P-p38蛋白相对表达量（0.46±0.09、0.38±0.06、0.33±0.06）均低于siRNA-阴性对照组（0.71±0.12、0.57±0.08、0.52±0.07）和空白对照组（0.73±0.13、0.56±0.07、0.54±0.09）,差异均有统计学意义（F=20.152、14.375、13.843,P=0.000、0.000、0.000）。结论特异性抑制EGFR可有效减少VSMC增殖和迁移能力,其机制可能与抑制丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路有关。