膜联蛋白A9在人结肠癌细胞株SW620增殖中的作用及机制

摘要

目的观察膜联蛋白A9（ANXA9）在人结肠癌细胞株SW620增殖中发挥的作用,并探讨其机制。方法实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot法检测人结肠癌细胞株HT29、SW620、SW480、LoVo、SW1116中ANXA9的表达;应用40 nmol/L的ANXA9-小干扰RNA（siRNA）转染ANXA9表达最强的SW620细胞株,抑制内源性ANXA9的表达;细胞计数试剂盒（CCK-8）实验检测转染对SW620细胞活性的影响;流式细胞术（FCM）检测转染ANXA9-siRNA对SW620细胞周期的影响;Real-time PCR和Western blot法检测增殖相关基因增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白（Cyclin）D、Cyclin E、p21、p16的表达。结果人结肠癌细胞株HT29、SW620、SW480、LoVo、SW1116中ANXA9 mRNA表达强度分别为0.027±0.004、0.041±0.005、0.028±0.003、0.033±0.003、0.025±0.005;ANXA9蛋白表达强度分别为0.287±0.076、1.246±0.103、0.326±0.040、0.387±0.097、0.295±0.064,其中SW620细胞ANXA9的mRNA和蛋白表达最强（F=8.212,P=0.003;F=81.728,P=0.000）。转染组、阴性对照组、空白组的ANXA9 mRNA和蛋白的表达水平分别为0.209±0.016、0.317±0.104,0.957±0.070、0.647±0.155,1.031±0.171、0.727±0.145。转染后转染组的细胞ANXA9的mRNA和蛋白均明显低于对照组及空白组（F=54.072,P=0.000;F=7.601,P=0.023）。CCK8结果显示,转染组、阴性对照组、空白组的细胞活性24 h分别为0.605±0.024、0.612±0.022、0.628±0.027;48 h分别为0.810±0.049、1.196±0.118、1.308±0.070;72 h分别为1.145±0.070、1.531±0.062、1.454±0.081。转染组的细胞活性明显低于对照组及空白组（F=38.742,P=0.000;F=32.56,P=0.000）。G0/G1、G2/M、S期的细胞比例在转染组为（66.870±3.850）%、（15.060±2.480）%、（18.080±1.420）%;阴性对照组为（50.070±3.370）%、（32.520±2.500）%、（17.410±0.920）%;空白组为（48.740±2.170）%、（32.390±1.820）%、（19.210±0.390）%。转染组细胞的G0/G1期比例升高（f=29.752,P=0.001）、G2/M期的比例降低（F=57.860,P=0.000）,S期细胞的比例无明显变化（F=1.568,P=0.284）。转染组细胞Cyclin D1、Cyclin E1的mRNA和蛋白表达明显降低[mRNA:F=462.821、5.512,P=0.000、0.044;蛋白:F=15.148、8.300,P=0.005、0.019)],而p21的mRNA和蛋白表达明显增高[mRNA:F=6.472,P=0.032;蛋白:F=21.230,P=0.002]。结论 ANXA9可能通过Cyclin D1、Cyclin E1、p21表达而参与了结肠癌细胞株SW620的增殖过程。