小干扰RNA沉默半乳糖凝集素3基因表达对胆管癌细胞增殖凋亡的影响及机制

摘要

目的抑制半乳糖凝集素3（Galectin-3）基因表达对胆管癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测胆管癌组织中Galectin-3基因的mRNA及蛋白表达;Si-Galectin-3转染HCCC-9801细胞,同时转染阴性对照组和正常对照组,转染48 h后Western blot检测Galectin-3、细胞核增殖抗原（Ki-67）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）蛋白表达;细胞计数试剂盒（CCK-8）实验和流式细胞仪分别检测细胞增殖及凋亡。结果胆管癌组织中Galectin-3基因的mRNA（5.558±0.056）及蛋白表达（0.269±0.025）显著高于癌旁组织（0.977±0.031、0.037±0.011）(tmRNA=8.626,PmRNA=0.003;t（蛋白表达）=8.997,P蛋白表达=0.002);si-Galectin-3组Galectin-3（0.094±0.012）、Ki-67（0.201±0.025）、β-catenin（0.261±0.024）、Cyclin D1（0.137±0.017）蛋白表达及细胞存活率[（95.26±3.42）%]均显著低于Normal组[（0.358±0.031）%、（0.426±0.032）%、（0.894±0.047）%、（0.435±0.031）%、（71.12±4.48）%](tGalectin-3=9.007,PGulectin-3=0.002;tKi-67=8.138,PKi-67=0.003;tβ-cutenin=9.345,Pβ-catenin=0.002;tCyclin D1=9.977,PCyelin D1=0.001;t细胞存活率=8.452,P细胞存活率=0.003;细胞凋亡率[（17.12±1.28）%]及Cleaved Caspase-3（0.121±0.15）表达均显著高于对照组[（1.54±0.47）%、0.031±0.011](t(细胞凋亡率=10.002,P细胞凋亡率=0.001;tCleaved Caspase-3=9.879,PCleaved Caspase-3=0.001。结论下调Galectin-3基因表达可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低HCCC-9801细胞增殖及诱导细胞的凋亡。