可调控性人PTEN基因重组腺病毒的构建与表达

摘要

目的 体外构建和表达可调控性人抑癌基因PTEN重组腺病毒。方法 将人PTEN基因全长cDNA约 1.4kb经过穿梭载体 ,与可调控性腺病毒载体骨架连接 ,得到重组人PTEN基因腺病毒 （Ad PTEN） ,酶切与聚合酶链反应 （PCR）鉴定后 ,在HEK2 93细胞包装、扩增 ,空斑试验测定病毒滴度 ,逆转录 聚合酶链反应 （RT PCR）、Westernblot法分别在mRNA、蛋白水平检测PTEN的表达。Ad X TRE βgal病毒作为对照。 结果 构建的Ad PTEN病毒滴度为 1.8× 10 7pfu/ml ,转染前列腺癌细胞株PC 3后RT PCR扩增出特异条带 （ 4 62bp） ,Westernblot检测PTEN蛋白 （ 60×10 3 ）有高表达 ,对照病毒转染后未测到PTEN的表达。结论 用体外连接法成功地构建了可调控性人抑癌基因PTEN重组腺病毒载体 ,并得到了正确、特异的表达。